IMÁGENES DEL PROYECTO

Fotografías tomadas del ánalisis de las muestras sanguíneas en donde se pudo ver la presencia de Anaplasma sp.

PROTOCOLOS DE DIAGNÓSTICO

El análisis de las muestras sanguíneas se llevó a cabo mediante los siguientes protocolos:

-          Examen de sangre en fresco

Esta prueba se utilizará para detectar parásitos móviles como Trypanosoma spp. La técnica consta de la colocación de una gota de sangre sobre un portaobjetos y adición de una gota de solución salina de igual volumen, se mezclará con una esquina del cubreobjetos y se cubrirá la preparación con éste. Posteriormente se observará al microscopio.

-          Examen de sangre en preparados fijos

Se realizará frotis y preparaciones de gota gruesa de las muestras de sangre extraídas  de 80 animales vivos.

ü  Preparaciones de gota gruesa

Se pondrá entre 2-3 gotas grandes de sangre fresca (recién tomada) sobre un portaobjetos, luego se las unirá y extenderá en un diámetro de 1cm con el uso de un portaobjetos, procedimiento que permitirá la desfibrinación del material. Posteriormente  se secará a 37ºC durante 1-2 horas o a temperatura ambiente entre 8-10 horas, en un lugar libre de contaminación.

ü  Frotis sanguíneo

Una vez recolectada las muestras de sangre se ejecutará frotis sanguíneo dentro de una hora tras la recogida de sangre. Esta técnica  se realizará por extensión, con el uso de dos portaobjetos en ángulo de 45º para sangre periférica (Figura 1) según Rodak (2004) lo detalla: se coloca una gota de sangre en un extremo de portaobjetos. El tamaño de la gota debe ser la adecuada aproximadamente de 2-3 mm de diámetro. Seguido a esto se sostendrá el portaobjetos extensor con firmeza con la mano dominante para el extendido incluyendo toda la gota de sangre (Figura 2).

-          Tinción de los preparados

Se realizará tinción de frotis sanguíneo y gota gruesa con los siguientes procedimientos.

ü  Tinción con Geimsa

Para la tinción con este colorante se fijará la muestra con metanol absoluto o alcohol metílico durante 3-4 minutos. Se sumergirá en una solución de Geimsa y agua des ionizada en una proporción de 1:9 durante 10-20 minutos. Después  se lavará con agua de chorro y se limpiará el dorso del portaobjetos con una gasa o alcohol humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de colorante. Finalmente se secará y se observará al microscopio. 

Cada una de las tinciones se procederá a observación microscópica y conteo de células:

-          Observación microscópica

Se observará las tinciones de los preparados de muestras sanguíneas por medio de microscopia óptica con un aumento de 100X y con aceite de inmersión, de cada una de las muestras recolectadas para la identificación de hemoparásitos y características morfológicas.

-          Determinación  de hematocrito

Para determinar el porcentaje o fracción celular se utilizará el método de tubo capilar. Con el uso de un tubo capilar se tomará muestra de sangre hasta llenar más de la mitad del tubo, luego se lo tapará con plastilina para colocarlo en la centrifuga de hematocrito y se determinará el valor con un lector de hematocrito.

CAMPO DE ACTUACIÓN

La línea que sigue el proyecto de  investigación es la Biología Animal y Microbiología aplicados a la Biotecnología. El análisis de hematocrito e identificación de hemoparásitos será desarrollado en los laboratorios de Biotecnología Animal.

OBJETO DE ESTUDIO

Se analizó la muestra sanguínea obtenida del ganado bovino de la cual se espera determinar la presencia de dos hemoparásitos Trypanosoma spp. y Anaplasma spp. mediante pruebas de diagnóstico de hemoparásitos.

INTRODUCCIÓN

La ganadería en varios países del mundo ha logrado un alto grado de desarrollo incrementando de esta manera las producciones de carne y lácteos, pero  existen varios factores que influyen en la producción tales como  factores medioambientales, la formación técnica de los operarios, pero sin lugar a dudas el parasitismo constituye uno de los mayores problemas para la ganadería (Provet, 2011). Existe un gran número de protozoarios que tienen localización hemática y parasitan tanto a la fauna silvestre y doméstica provocando en ellos enfermedades que afectan a la integridad del organismo e incluso pueden causar la muerte del animal, por tal motivo el diagnóstico de hemoparásitos en rumiantes requiere establecer la condición del animal a tratar y contrastarla a su vez con el hematocrito (Rodríguez et al., 2005).

A nivel del sistema hemático existen protozoarios llamados hematozoarios los cuales poseen una alta capacidad patógena, en el caso del ganado bovino, los hemoparásitos causan un cuadro clínico caracterizado principalmente por debilidad general, fiebre y anemia.