El análisis de las muestras sanguíneas se llevó a
cabo mediante los siguientes protocolos:
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Examen
de sangre en fresco
Esta prueba se utilizará para detectar parásitos
móviles como Trypanosoma spp. La
técnica consta de la colocación de una gota de sangre sobre un portaobjetos y
adición de una gota de solución salina de igual volumen, se mezclará con una esquina
del cubreobjetos y se cubrirá la preparación con éste. Posteriormente se
observará al microscopio.
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Examen
de sangre en preparados fijos
Se realizará frotis y preparaciones de gota gruesa
de las muestras de sangre extraídas de
80 animales vivos.
ü Preparaciones de gota gruesa
Se pondrá entre 2-3 gotas grandes de sangre fresca
(recién tomada) sobre un portaobjetos, luego se las unirá y extenderá en un
diámetro de 1cm con el uso de un portaobjetos, procedimiento que permitirá la
desfibrinación del material. Posteriormente
se secará a 37ºC durante 1-2 horas o a temperatura ambiente entre 8-10
horas, en un lugar libre de contaminación.
ü Frotis sanguíneo
Una vez recolectada las muestras de sangre se
ejecutará frotis sanguíneo dentro de una hora tras la recogida de sangre. Esta
técnica se realizará por extensión, con
el uso de dos portaobjetos en ángulo de 45º para sangre periférica (Figura 1)
según Rodak (2004) lo detalla: se coloca una gota de sangre en un extremo de
portaobjetos. El tamaño de la gota debe ser la adecuada aproximadamente de 2-3
mm de diámetro. Seguido a esto se sostendrá el portaobjetos extensor con
firmeza con la mano dominante para el extendido incluyendo toda la gota de
sangre (Figura 2).
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Tinción
de los preparados
Se realizará tinción de frotis sanguíneo y gota
gruesa con los siguientes procedimientos.
ü Tinción con Geimsa
Para la tinción con este colorante se fijará la
muestra con metanol absoluto o alcohol metílico durante 3-4 minutos. Se
sumergirá en una solución de Geimsa y agua des ionizada en una proporción de
1:9 durante 10-20 minutos. Después se
lavará con agua de chorro y se limpiará el dorso del portaobjetos con una gasa
o alcohol humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de colorante.
Finalmente se secará y se observará al microscopio.
Cada una de las tinciones se procederá a observación
microscópica y conteo de células:
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Observación
microscópica
Se observará las tinciones de los preparados de
muestras sanguíneas por medio de microscopia óptica con un aumento de 100X y
con aceite de inmersión, de cada una de las muestras recolectadas para la
identificación de hemoparásitos y características morfológicas.
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Determinación de hematocrito
Para determinar el porcentaje o fracción celular se
utilizará el método de tubo capilar. Con el uso de un tubo capilar se tomará
muestra de sangre hasta llenar más de la mitad del tubo, luego se lo tapará con
plastilina para colocarlo en la centrifuga de hematocrito y se determinará el
valor con un lector de hematocrito.
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